Iniciação do experimento – Materiais utilizados, enumeração, coleta e homogeneização da saliva

Materiais utilizados: tubos de ensaio contendo salina , becker pequeno estéril para coletar a saliva, becker com álcoolpara esterelizar a alça de drigalski ,pipetador , ponteiras estéreis para o pipetador, placas de petri com hagar Mitis Salivarius ,alça de drigalski , bico de Bunsen, fósforo, álcool, algodão, papel alumínio, caneta para marcar os tubos e as placas e papel pardo para forrar a bancada.




Numere de 1 a 5 os tubos de ensaio com a solução salina.




Numere de 1 a 5 as placas de Petri.




Ascenda o bico de Busen (chama). Lembre-se de SEMPRE trabalhar próximo ao fogo.




Becker estéril para coletar saliva.




Abra o becker próximo ao fogo.




Colete saliva.

A DICA DO DIA: para ter maior quantidade de saliva na boca, dê mordidinhas na ponta da língua!




Posicione o pipetador no 100 para homogeinizar a saliva.




Coloque uma nova ponteira no pipetador.




Puxe e solte a saliva contra a parede do becker aproximadamente 10 vezes.

Diluição seriada

Não esqueça!!! SEMPRE trabalhe próximo ao fogo!!!!

Para iniciar a diluição seriada posicione o pipetador em 050.




Pegue do becker, com o pipetador, a quantia exata de saliva homogeneizada.




Adicione a saliva no Tubo 1. Homogeneizar o tubo.




Após homogeneizar o tubo 1, retire a quantidade exata (demarcada no pipetador) da solução presente no tubo 1.




Adicione ao tubo 2 a quantia de solução retirada do tubo 1. Homogeneizar




A DICA DO DIA: PARA HOMOGENEIZAR, FECHE O TUBO E SEGURE FIRMEMENTE PELA TAMPA. BATA COM O DEDO INDICADOR , DE CIMA PARA BAIXO, NA PARTE FINAL DO TUBO.




Retire a mesma quantia de solucao do tubo 2.




Adicione ao tubo 3 a quantia de solução retirada do tubo 2. Homogeneizar




Retire a mesma quantia de solucao do tubo 3.




Adicione ao tubo 4 a quantia de solução retirada do tubo 3. Homogeneizar





Retire a mesma quantia de solucao do tubo 4.




Adicione ao tubo 5 a quantia de solução retirada do tubo 4. Homogeneizar



Descarte as ponteiras em um local reservado.

Aplicação nas placas de Petri e Jarra de Cultivo em Anaerobiose

A placa para o cultivo contém o hagar Mitis Salivarius, o qual contém 20% de sacarose, o antibiótico bacitracina, que age em bactérias Gram + (menos os do grupo mutans). Também contém azul de tripan, o qual dá a coloração à placa e o corante cristal violeta que ajuda na identificação das bactérias Gram +.

Quando a saliva é colocada no hágar, deve-se usar a alça Drigalski para espalhar as bactérias na placa. Esse procedimento deve ser feito rapidamente, pois o hagar Mitis Salivarius é muito concentrado, portanto a água presente nas bactérias vai para o meio e elas ficam desidratadas, não ocorrendo crescimento nenhum.

A alça DEVE estar esterelizada. Coloca-se alça de drigalski no álcool e no fogo, colocando-a inclinada e nunca em posição horizontal para não esterilizar só a porção final mas toda ela.Esperar que a mesma esfrie para que as bactérias não sejam queimadas. Veja as fotos a seguir:

IMPORTANTE: TODOS OS PROCEDIMENTOS DEVEM SER REALIZADOS PERTO DA CHAMA!!








Posicione o pipetador em 010 = 0,1ml.





Coloque uma nova ponteira.




Pegue o tubo de ensaio 1 e a placa 1.




Pegue,com o pipetador, do tubo 1 a quantidade exata de saliva diluida e aplique na placa de Petri 1.




Rapidamente com a alça de drigalski espalhe pela placa em forma de zigue-zague ou movimentos de vai e vem sempre girando a placa para que cresçam colônias por toda a placa.




Repita o procedimento em todos as placas. Tubo 2 na placa 2, tubo 3 na placa 3, tubo 4 na placa 4 e tubo 5 na placa 5. NUNCA esqueça de esterelizar a alça de drigalski antes de cada rastelagem.



























Jarra de cultivo em anaerobiose.




Coloque todas as placas, com o hagar voltado para cima, dentro da jarra. Coloque um pedaço de papel alumínio e dentro dele um pedaço de algodão.




Coloque Álcool no algodão.




Acenda o fósforo e coloque fogo no algodão para que após fechar o pote aja um ambiente em anaerobiose (apenas Gás Carbônico).




Tampe rapidamente a Jarra de cultivo em anaerobiose.









Coloque a jarra para cultivo em anaerobiose com os meios de cultura dentro de uma estufa a 35º e aguarde 48 horas para o resultado final.